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分子標記新技術-相關序列擴增多態性之介紹

  • 出版日期:98-09-01
  • 點閱數:323
  • 修改時間:108-06-13

目前應用於遺傳育種領域的分子標記很多,主要有限制性片斷長度多態性 (RFLP)、隨機擴增多態性DNA (RAPD)、擴增片斷長度多態性 (AFLP)、微衛星DNA或簡單重複序列 (SSR)。每種分子標記都有其分析原理和特點。RFLP是利用放射同位素或非放射性物質標記探針,與轉移至尼龍膜上的總基因組DNA (經限制性內切酶消化處理) 雜交,由限制性酶切片段的大小,來檢測不同遺傳位點之等位變異;RFLP標記呈共顯性遺傳,分析結果穩定可靠,但有DNA的需要量大、檢測步驟較多、週期較長、多態性較少等缺點。RAPD技術是以基因組DNA為模板,以一個隨機的寡聚核苷酸作引物 (primer),經PCR擴增反應,產生不連續的DNA產物,以檢測DNA序列的多態性,其操作簡便,但具重複性較差之缺失。SSR是對基因組中的微衛星DNA進行擴增,其優點是高水準的多態性、容易檢測和產生共顯性標記,這種標記費工耗時、且分子量分析不易;AFLP是選擇性擴增基因組DNA的酶切片段,重複性佳,缺點是操作流程較為複雜,需要多步驟的操作,包括DNA酶切、連接 (Ligation) 和擴增,要使每一條件都達到最優化較為困難;此外,甲基化敏感的限制性內切酶對DNA的甲基化可導致〝假多態性〞的產生,AFLP分析中識別AATT位點的Mse I酶常會引起一些物種基因組中標記分布不均衡的現象。