一、泥鰍的產卵習性
泥鰍為多次性產卵魚類，在自然條件下，4月上旬開始繁殖，5－6月是產卵盛期，繁殖的水溫為18－30℃，最適水溫是22－28℃。通常在降雨後或漲水時，選擇清澈的淺水處產卵。開始時數尾雄魚追逐雌魚，後來一尾雄魚突然用身體捲住雌魚腹部，雌魚受到壓迫的刺激而排卵，同時雄魚也排出精液，完成受精。受精卵外有一層極薄的黏液層，可附著於水草孵化。人工養殖泥鰍產卵季節南部為每年2－9月，最盛期為3－5月。北部為每年3－9月，最盛期為4－7月。
二、種魚雌雄選別
(一) 體型
雄魚較小，背鰭末端兩側有肉質隆起；雌魚較大，沒有肉質隆起，產過卵的在腹鰭上方的軀體因雄魚的纏繞而有白色斑點的產卵記號，未產卵者則沒有。
(二) 胸鰭
雄魚較大，前端尖形，第二鰭條明顯；雌魚較小，呈橢圓形。
(三) 產卵期的腹部
雄魚扁平，雌魚膨大且色澤變為略帶透明的粉紅色或黃色。
三、繁殖方法
(一) 完全自然繁殖
把選取的種魚按雌雄比例放入已準備好的產卵池即可。
(二) 人工催熟自然產卵
把選取的種魚經荷爾蒙處理 (方法與人工繁殖同)，按雌雄1：2比率放入產卵池內準備好的網箱，下鋪紗窗網或棕櫚片，讓其自然產卵、受精及孵化。種魚產卵後可很容易撈起，以避免其大量吞食受精卵和孵出的魚苗。
(三) 人工繁殖
在選得優良種魚後，為防止因環境改變停止攝食，引起生殖腺指數下降，不可蓄養過久，應立即實施下列處理：
1. 催產處理
雌魚可先用2－5% Urethane或每公升水中加0.7－0.8毫升E.G.M.E麻醉後，每公克體重注射5－15國際單位的絨毛膜促性腺激素 (HCG)。而孫等 (2007) 建議在每尾約25 g大鱗泥鰍，注射HCG的劑量為250－300國際單位；另外使用地歐酮 (DOM) 及鮭魚激素類似物 (S-GnRH-A)混合注射劑量，分別各為10 mg。由於泥鰍體型較小，注射液不可超過0.2 cc，以免體軀腫脹或藥液溢出。注射部位為背腹間之肌肉較為安全易行，通常先以針尖垂直刺入肌肉少許後，斜向前方再行注射，雄魚不需注射，但如注射微量，可以增加精子的活力。
處理後的種魚，雌雄應分開放入小型容器內的清水中，使其甦醒，蓄養待熟，應避免各種騷擾，並使水溫保持與處理前相似，如果變化±5℃，排卵率會降低。
水溫為22－25℃時，雌魚經注射荷爾蒙後8－15小時，即可排卵，水溫愈高，成熟時間越短。通常在注射後6、7小時後，用手輕按腹部以檢查卵的成熟度，如有半透明黃色帶黏性的卵排出，即可進行採卵，最慢必須在6小時內採卵完畢，以免過熟。
採卵時，先以乾布或毛巾將雌魚身體擦乾，將卵擠至乾燥的碗中，如帶血或白色的卵，應丟棄不用並停止採卵。所擠出之卵若呈水狀，即表示卵已過熟。
2. 採精或受精
用剪刀將雄魚頸部剪斷，使其失去活動力，再將腹部由肛門向頭部剖開，用鑷子除去內臟，即可見到脊椎骨附近左右各懸附一個白色的精巢，取出剪碎後，放入研磨器研磨，再加少許林格爾氏液或生理食鹽水均勻混合備用。
製備的精液和採取的卵，在未受精前絕不可接觸水，否則受精率會大為減低。將精液倒入原已盛有卵的碗中，用羽毛輕攪，再用清水洗1－2次，把雜質及污物洗除，即完成受精。