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金銀花萃取物有效提高鱸魚對鏈球菌感染症之抗病力

  • 作者:郭錦朱、張博淵、賴哲翊、林如謙 / 東港生技研究中心

金銀花又名忍冬花,為忍冬科 (Caprifoliaceae) 多年生半常綠纏繞性木質藤本植物忍冬 (Lonicera japonica) 的花蕾或帶初開的花 (圖一),是臺灣中低海拔與平地常見的藥用植物,具有殺菌、抗病毒、解熱、抗發炎、保肝、止血、抗氧化及免疫調節等作用,其主要的活性成分為綠原酸 (Chlorogenic acid、3-O-Caffeoylquinic acid;CA)。有鑒於金銀花對轉糖鏈球菌(Streptococcus mutans)、牙周致病菌 (Aggregatibacter actinomycetemcomitans)、李斯特菌 (Listeria monocytogenes)、仙人掌桿菌 (Bacillus cereus)、金黃葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)、沙門氏腸炎桿菌 (Salmonella enteritidis)、大腸桿菌 (Escherichia coli)、綠膿桿菌 (Pseudomonas aeruginosa)、克雷伯氏肺炎菌 (Klebsiella pneumoniae) 等具抗菌活性 (Shang et al., 2011),因此,本所東港生技中心乃著手進行金銀花萃取物之製備,並探討其在鱸魚體內外對瓶鼻海豚鏈球菌 (Streptococcus iniae) 之拮抗效力,以建立其應用方法。

 

圖1金銀花

圖一、金銀花

 

金銀花萃取物製備及綠原酸含量檢測

 

金銀花以甲醇萃取後,收集萃取液減壓濃縮至乾,再以水回溶,水溶液冷凍乾燥即得金銀花萃取物 (圖二)。根據臺灣中藥典規定,金銀花萃取物之綠原酸含量不得低於1.5% (衛福部, 2018),因此以高效能液相層析儀 (HPLC) 串連光二極體儀 (photodiode array detector) 檢測綠原酸含量,其監測波長及滯留時間分別為327 nm及6.5分鐘 (圖三),定量檢量線為Y=3.83x104 X–1.59 x104 (r2 = 0.9999),結果顯示本研究製備的金銀花萃取物之綠原酸含量為7%,高於藥典規範的標準。

圖2金銀花藥材與其萃取物

圖二、金銀花藥材與其萃取物

 

圖三檢測金銀花萃取物內綠原酸含量之層析圖

圖三、檢測金銀花萃取物內綠原酸含量之層析圖

 

金銀花對鏈球菌之抗菌活性

 

金銀花生藥及其萃取物對瓶鼻海豚鏈球菌的24小時最小殺菌濃度 (MBC) 分別為3.1及0.6 mg/ml,48小時的MBC則各為6.2及1.1 mg/ml,顯見金銀花萃取物的殺菌力比生藥提高5倍以上。將金銀花萃取物以0、1、2、3及4%添加於飼料,投餵鱸魚 (均重3.5±0.2 g) 14天,再以瓶鼻海豚鏈球菌進行攻擊,結果如圖四所示,所有金銀花萃取物添加組之抗病力皆顯著優於對照組 (<0.01),且3及4% 添加組間無顯著差異 (p>0.05),保護力分別提高19.4±3.4%、31.3±3.4%、50.7±3.0% 及53.7±3.0%。

圖四瓶鼻海豚鏈球菌攻擊之累積死亡率

圖四、飼料中添加不同濃度的金銀花萃取物投餵鱸魚14天後以瓶鼻海豚鏈球菌攻擊之累積死亡率

 

結論

 

金銀花萃取物在生體外對鏈球菌具強抗菌力,若以1〜4%添加於飼料中,投餵鱸魚2週,對瓶鼻海豚鏈球菌皆具顯著抗病力,保護力隨金銀花萃取物添加量增加而提高,最佳保護力可達50%以上。因此建議在鏈球菌感染症好發季節前,於飼料中添加3%金銀花萃取物投餵2週,將有助於提高魚對疾病之抗病力,降低養殖魚爆發疫病之機會及死亡率,提高漁民收益,間接也可以減少藥物的使用量。