金銀花又名忍冬花,為忍冬科 (Caprifoliaceae) 多年生半常綠纏繞性木質藤本植物忍冬 (Lonicera japonica) 的花蕾或帶初開的花 (圖一),是臺灣中低海拔與平地常見的藥用植物,具有殺菌、抗病毒、解熱、抗發炎、保肝、止血、抗氧化及免疫調節等作用,其主要的活性成分為綠原酸 (Chlorogenic acid、3-O-Caffeoylquinic acid;CA)。有鑒於金銀花對轉糖鏈球菌(Streptococcus mutans)、牙周致病菌 (Aggregatibacter actinomycetemcomitans)、李斯特菌 (Listeria monocytogenes)、仙人掌桿菌 (Bacillus cereus)、金黃葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)、沙門氏腸炎桿菌 (Salmonella enteritidis)、大腸桿菌 (Escherichia coli)、綠膿桿菌 (Pseudomonas aeruginosa)、克雷伯氏肺炎菌 (Klebsiella pneumoniae) 等具抗菌活性 (Shang et al., 2011),因此,本所東港生技中心乃著手進行金銀花萃取物之製備,並探討其在鱸魚體內外對瓶鼻海豚鏈球菌 (Streptococcus iniae) 之拮抗效力,以建立其應用方法。
圖一、金銀花
金銀花萃取物製備及綠原酸含量檢測
金銀花以甲醇萃取後,收集萃取液減壓濃縮至乾,再以水回溶,水溶液冷凍乾燥即得金銀花萃取物 (圖二)。根據臺灣中藥典規定,金銀花萃取物之綠原酸含量不得低於1.5% (衛福部, 2018),因此以高效能液相層析儀 (HPLC) 串連光二極體儀 (photodiode array detector) 檢測綠原酸含量,其監測波長及滯留時間分別為327 nm及6.5分鐘 (圖三),定量檢量線為Y=3.83x104 X–1.59 x104 (r2 = 0.9999),結果顯示本研究製備的金銀花萃取物之綠原酸含量為7%,高於藥典規範的標準。
圖二、金銀花藥材與其萃取物
圖三、檢測金銀花萃取物內綠原酸含量之層析圖
金銀花對鏈球菌之抗菌活性
金銀花生藥及其萃取物對瓶鼻海豚鏈球菌的24小時最小殺菌濃度 (MBC) 分別為3.1及0.6 mg/ml,48小時的MBC則各為6.2及1.1 mg/ml,顯見金銀花萃取物的殺菌力比生藥提高5倍以上。將金銀花萃取物以0、1、2、3及4%添加於飼料,投餵鱸魚 (均重3.5±0.2 g) 14天,再以瓶鼻海豚鏈球菌進行攻擊,結果如圖四所示,所有金銀花萃取物添加組之抗病力皆顯著優於對照組 (<0.01),且3及4% 添加組間無顯著差異 (p>0.05),保護力分別提高19.4±3.4%、31.3±3.4%、50.7±3.0% 及53.7±3.0%。
圖四、飼料中添加不同濃度的金銀花萃取物投餵鱸魚14天後以瓶鼻海豚鏈球菌攻擊之累積死亡率
結論
金銀花萃取物在生體外對鏈球菌具強抗菌力,若以1〜4%添加於飼料中,投餵鱸魚2週,對瓶鼻海豚鏈球菌皆具顯著抗病力,保護力隨金銀花萃取物添加量增加而提高,最佳保護力可達50%以上。因此建議在鏈球菌感染症好發季節前,於飼料中添加3%金銀花萃取物投餵2週,將有助於提高魚對疾病之抗病力,降低養殖魚爆發疫病之機會及死亡率,提高漁民收益,間接也可以減少藥物的使用量。