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淺談脈衝式凝膠電泳技術

  • 出版日期:98-09-01
  • 點閱數:2652
  • 修改時間:108-06-13

DNA主要由五碳糖、含氮鹼基及帶負電的磷酸根組成,DNA電泳的原理即利用磷酸根帶負電的特性,於電場受力穿過膠體,向正極移動。因為不同分子量的DNA在膠體孔徑中的泳動速率有所差異,藉此可將不同大小的DNA分離。若欲分離分子量較小或是樣本間分子量差距較小的DNA,可使用非變性聚丙烯醯胺膠體電泳 (Polyacrylamide Gel Electrophoresis, PAGE),以3.5-20.0%膠體濃度,在垂直式電泳槽進行電泳,可分析6 bp-3 Kb大小的DNA。而通常在一般生物學的研究上最常使用的膠體為瓊膠 (agarose gel),膠體濃度為0.3-2.0%,以水平式電泳槽進行電泳,可分析100 bp-60 Kb大小的DNA。然而,如果DNA分子量大於15 Kb,在一般瓊膠電泳操作時,DNA往往會一起移動,無法有效分離。為了克服這個難題,1984年哥倫比亞大學Schwartz和Cantor在一般瓊膠電泳操作上,引進一個交替變化的電壓梯度,使得大分子DNA能較有效的分離,顯著提高了大分子DNA的解析度,並成功應用在釀酒酵母染色體DNA分離,這個技術就稱為脈衝式凝膠電泳 (Pulsed Field Gel Electrophoresis, PFGE)。PFGE的發展擴大了DNA片段的解析範圍,使分子生物學的研究邁向新的領域。